shkolageo.ru 1 2 ... 6 7


На правах рукописи


Сивкова Татьяна Николаевна


Кариопатические и патоморфологические изменения под действием продуктов метаболизма паразитов и влияние на репродуктивную функцию домашних плотоядных


Специальность 03.00.11 – паразитология




АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени

доктора биологических наук


Москва- 2010


Работа выполнена в ГНУ Всероссийском научно-исследовательском институте гельминтологии имени К.И.Скрябина (ВИГИС)


Научный консультант: доктор биологических наук, профессор

БЕРЕЖКО Вера Кузьминична


Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор

Новик Тамара Самуиловна


доктор биологических наук, профессор

Новак Михаил Дмитриевич


доктор биологических наук, доцент

Жданова Ольга Борисовна


Ведущая организация: Московский государственный университет прикладной биотехнологии


Защита состоится 12 мая 2010г. в 11 часов на заседании Совета по защите докторских и кандидатских диссертаций Д 006.011.01 при ГНУ «Всероссийский научно-исследовательский институт гельминтологии имени К.И.Скрябина» (ВИГИС)


Адрес: 117218, Москва, Б.Черемушкинская ул., д.28.


С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ВИГИС.

Автореферат размещен на официальном сайте ВАК РФ.


Автореферат разослан «___»____________ 2010г.


Ученый секретарь Совета по защите

докторских и кандидатских диссертаций,

доктор биологических наук В.К. БЕРЕЖКО


ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. В настоящее время на территории крупных городов собаки и кошки составляют подавляющее большинство пациентов ветеринарных клиник. По данным Воличева А.Н. (2000), Пешкова Р.А. (2007) среди всех заболеваний плотоядных инвазионные болезни занимают четвертое-пятое место. Широкому распространению паразитарных заболеваний способствуют незначительное количество мест, приспособленных для выгула собак, некачественное кормление и содержание животных, отсутствие своевременной диагностики этих заболеваний, дегельминтизация без контроля со стороны ветеринарных специалистов, а также отсутствие обработки против простейших.


Болезни репродуктивной системы мелких домашних животных составляют от 12 до 20% общего числа заболеваний (Федин А.А., 2005; Шафикова А.В., 2006). Этиологическими факторами при данных патологиях принято считать патогенную и условно-патогенную микрофлору (Емельянова Н.С., 2007, Кухарь И.В., 2007).

В последние годы активно идет изучение патологии при гельминтозах и разработка способов ее коррекции. Известно, что паразит оказывает на организм хозяина не только механическое, трофическое, но и аллергическое и токсическое воздействие. Токсины гельминтов угнетают деятельность центральной нервной, сердечно – сосудистой и пищеварительной систем. Установлено отрицательное влияние некоторых гельминтов на функцию органов размножения хозяев (Карбышева Н.В. и др., 2000; Карбышева Н.В. и др., 2001; Гасанова Т.А., 2006; Соловьева А.В., 2007; Weigel M.M. et al., 1996). Данные исследования проводятся, главным образом, в гуманитарной медицине, тогда как сведений о влиянии гельминтов и их токсинов на репродуктивную функцию домашних животных в литературе имеется недостаточно. В связи с возрастающей популярностью племенного разведения собак и кошек, широким распространением у них паразитарных заболеваний, проблема изучения влияния воздействия гельминтов на размножение мелких домашних животных является весьма актуальной.

Несмотря на то, что в настоящее время на рынке товаров для животных широко представлены различные промышленные корма, большинство владельцев продолжает отдавать предпочтение натуральному кормлению, которое осуществляется продуктами животного (мясо, рыба) и растительного происхождения (крупы). Жители крупных городов приобретают продукты в основном в специализированных магазинах или на рынках, где продукция животного происхождения сертифицирована и проходит ветеринарно–санитарный контроль.

Известно, что рыба, инвазированная личинками гельминтов, может стать причиной заражения человека и плотоядных животных. В речной рыбе содержатся метацеркарии трематод (Opisthorhis felineus, Clonorhis sinensis, Echinochasmus perfoliatus и др.) и плероцеркоиды широкого лентеца Dyphillobothrium latum. Большинство владельцев животных имеет представление об опасности этих заболеваний, поэтому избегает кормления собак и кошек сырой речной рыбой. Морскую рыбу часто скармливают в сыром виде.


Анизакидоз, вызванный личинками нематод семейства Anisakidae (Skrjabin et Korokhin, 1945), является опасным для здоровья человека заболеванием (Горохов В.В. и др.,1998; Довгалев А.С. и др., 1999; Карманова И.В. и др., 2002). Возбудители анизакидоза человека - личиночные стадии развития гельминтов родов Anisakis, Contracaecum, Pseudoterranova, Hysterothylacium. За последние годы во всем мире было зарегистрировано несколько случаев этого заболевания в основном в тех странах, где придерживаются традиционной японской и китайской кухни, в которой рыба и другие гидробионты используются в сыром или полусыром виде.

В замороженной рыбе и других гидробионтах допускается наличие нежизнеспособных личинок гельминтов (Поздняковский В.М. и др., 2005). Однако, товарная рыба, содержащая паразитов, вызывает негативную реакцию покупателей. Необходимо также помнить, что соматические белки гельминтов и продукты их метаболизма могут оказывать токсическое и аллергенное действие. Установлено, что инвазированная рыба имеет более интенсивную обсемененность микрофлорой по сравнению со здоровой, что отрицательно сказывается на сроках хранения (Софронова П.П., 1999; Гаевская А.В., 2004; Рамлочан П., 2006), и может стать причиной микробной интоксикации.

В связи с этим изучение патогенного воздействия гельминтов и простейших на функцию размножения животных актуально. Имеется необходимость разработки экономически эффективных методов обеззараживания рыбной продукции при таких опасных заболеваниях как анизакидоз.

Цели и задачи исследований. Целью настоящей работы явилось изучение кариопатических и патоморфологических изменений под действием гельминтов и их антигенов, личинок анизакид и некоторых простейших на органы размножения и патологии беременности, разработка профилактических мероприятий.

В задачи исследований входило:

  • Изучение распространения паразитозов домашних плотоядных и установление взаимосвязи с заболеваниями половой сферы.


  • Исследование патологии плаценты на фоне паразитарных заболеваний.

  • Выявление степени пораженности товарной рыбы личинками анизакид.

  • Приготовление соматических антигенов-экстрактов и метаболитов гельминтов, их биохимический и иммунохимический анализ.

  • Установление клинической и морфологической патологии, вызванной продуктами метаболизма личинок анизакид.

  • Изучение эмбриотоксического и кариопатического действия продуктов жизнедеятельности личинок анизакид в сравнении с кариопатическим действием белковых продуктов жизнедеятельности других гельминтов.

  • Установление степени влияния белковых компонентов личинок анизакид на репродуктивную функцию самцов лабораторных мышей.

  • Оценка влияния витаминов – антиоксидантов на кариопатические свойства личинок анизакид.

  • Разработка методов обезвреживания экскреторно – секреторных и соматических продуктов метаболизма личинок анизакид.

Научная новизна. Впервые изучено распространение гельминтозов и протозоозов желудочно-кишечного тракта среди домашних плотоядных животных г. Перми, выявлены случаи заражения ослеруозом, капилляриозом, спироцеркозом, мезоцестоидозом, криптоспоридиозом, неоспорозом, бластоцистозом. Впервые проведен серологический мониторинг токсоплазмоза собак и кошек и лямблиоза собак в городской популяции г. Перми.

Установлены патогистологические изменения в плаценте плотоядных на фоне инвазионной патологии.

Впервые оценено влияние соматических и экскреторно-секреторных продуктов личинок анизакид, токсокар, гидатигеры и дифиллоботриума на митоз клеток красного костного мозга и деление клеток семенников лабораторных животных. Выявлено эмбриотоксическое действие продуктов метаболизма личинок анизакид на лабораторных животных. Проведена оценка влияния термической обработки на кариопатические и патогенные свойства личинок анизакид.

Практическая ценность и внедрение результатов исследований.


Материалы исследований, выполненные автором самостоятельно, а также совместно с другими учеными и специалистами используются для чтения лекций и проведения лабораторных занятий со студентами факультета ветеринарной медицины по курсу «Паразитология и инвазионные болезни животных» в ФГОУ ВПО «Пермская ГСХА».

Разработаны:


  1. Рекомендации «Гельминтологические исследования», ПГСХА, 2005;

  2. Методическое пособие «Получение и характеристика антигенов гельминтов», ПГСХА, 2009;

  3. Методическое пособие «Профилактика анизакидоза», ПГСХА, 2009;

  4. Лабораторный регламент «На проведение кариопатической оценки продуктов метаболизма гельминтов in vivo», утвержден на секции «Инвазионные болезни животных» РАСХН 25 сентября 2009г;

  5. Методические рекомендации «Способ определения поражения рыбной продукции личинками анизакид», утверждены на секции «Инвазионные болезни животных» РАСХН 25 сентября 2009г.

Апробация работы.
Основные материалы диссертационной работы представлены и обсуждены на Всероссийской конференции «Актуальные вопросы ветеринарной медицины мелких домашних животных», Екатеринбург, 2004; Международной научно-практической конференции «Вузовская наука – сельскому хозяйству», Барнаул, 2005; Научных конференциях «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями» (2007-2009гг.); Первой региональной научно-практической конференции «Организм как среда обитания», Оренбург, 15-17 мая 2007 г.; Научно-практической конференции «Современные проблемы биологии, экологии, физиологии и ветеринарии домашних животных», Тюмень, 2008; VI Международной научно-практической конференции «Паразитарные болезни человека, животных и растений», Витебск, ВГМА, 2008; Всероссийских научно-практических конференциях ФГОУ ВПО «Пермская ГСХА» (2005-2010гг.); Всероссийской научно-практической конференции «Инновационный потенциал аграрной науки – основа развития АПК», Пермь, 2008; Международной научно-практической конференции, посвященной 95-летию Саратовского Госагроуниверситета «Вавиловские чтения», Саратов, 2008; Международной научно-практической конференции, посвященной 65-летию образования Волгоградской государственной сельскохозяйственной академии, «Использование инновационных технологий для решения проблем АПК в современных условиях», Волгоград, 2009; Международной научно-практической конференции, посвященной 100-летию со дня рождения П.Г.Петского, «Современные научные тенденции в животноводстве», Киров, 16-17 апреля 2009 года; Региональной конференции молодых ученых «Современные тенденции развития АПК в Северном Зауралье», Тюмень, 2009; Всероссийской научно-практической конференции «Современные достижения ветеринарной медицины сельскохозяйственному производству», Донской ГАУ, 2009; Международной научно-практической конференции «Высшее образование и аграрная наука – сельскому хозяйству», Казахстан, Семей, 2009; Международной научно-практической конференции, посвященной 35-лению образования факультета ветеринарной медицины Кубанского государственного аграрного университета «Достижения современной ветеринарной науки и практики в области охраны здоровья животных», 2009; секции «Инвазионные болезни животных» РАСХН 25 сентября 2009г.; научной конференции «Современный мир, природа и человек», Томск, 2009; научной конференции «Актуальные проблемы инфекционной патологии», Томск, 2009; Международной научно-практической конференции «Вавиловские чтения», Саратов, 2009.


Личный вклад соискателя.
Представленная диссертационная работа является результатом многолетних (с 2002 по 2010 год) научных исследований автора. Исследования паразитофауны плотоядных, сбор патологического и гельминтного материала, приготовление антигенов-экстрактов и метаболитов и оценка их кариопатического и аллергенного действия, в том числе внутрибрюшинная иммунизация мышей, пероральное введение крысам личинок гельминтов, вскрытие лабораторных животных и приготовление мазков отпечатков красного костного мозга и семенников с последующим микроскопическим анализом выполнены диссертантом лично. Гистологические исследования были проведены в лаборатории гистопатологии Краевой детской клинической больницы Пермского Края при участии к.м.н. Патлусовой Е.С.

Работа выполнялась при консультативном руководстве доктора биологических наук, профессора В.К. Бережко.

Основные положения, выносимые на защиту.


  • Анализ зараженности кошек и собак городской популяции Перми инвазионными болезнями.

  • Влияние гельминтов и простейших на морфологию плаценты, патологию органов размножения плотоядных.

  • Получение экстрактов и метаболитов гельминтов и оценка их антигенного, кариопатического и патоморфологического влияния на клетки и органы лабораторных животных, кариопротективное действие витаминов-антиоксидантов А и Е.

  • Распространение личиночного анизакидоза товарной рыбы.

  • Иммунохимический анализ антигена-экстракта из личинок анизакид.

  • Влияние температурной обработки и СВЧ на антигенное и кариопатическое действие личинок анизакид.

Публикации.
По теме диссертации опубликовано 39 научных работ, в том числе 7 в изданиях, рекомендованных ВАК РФ для докторских диссертаций, в которых изложены основные положения и выводы по изучаемым вопросам.

Объем и структура диссертации.


Диссертация изложена на 243 страницах компьютерного текста, включает 26 таблиц, 40 рисунков, состоит из введения, обзора литературы, раздела собственных исследований, включающего: материалы и методы, результаты исследований и их обсуждение, выводы, список литературы и приложение. Список использованной литературы включает 394 источника, в том числе 239 отечественных и 155 зарубежных авторов.


  1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ


В главе представлен анализ работ по распространению гельминтов и простейших у плотоядных животных на территории Российской Федерации, влиянию инвазии на деление половых и соматических клеток организма хозяина и протективному действию витаминов – антиоксидантов, развитию патологии беременности на фоне паразитарных заболеваний. Представлены данные по распространению личиночного анизакидоза среди морской рыбы и способов ее обеззараживания, методов диагностики данной инвазии у человека и животных.


  1. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

    1. Материалы и методы

Исследования паразитофауны домашних плотоядных

Для определения экстенсивности инвазии кишечными паразитами проводили обследование домашних кошек и собак, которые поступали в ветеринарные клиники города. Кроме того, обследованию подвергали собак различных служебных пород (немецкая, кавказская, среднеазиатская и французская овчарки, ротвейлеры, лабрадоры, сенбернары, русские спаниели, американские кокер-спаниели и спрингер-спаниели) в возрасте от 1 месяца до 9 лет, принадлежавших питомнику Зонального кинологического центра при ГУВД г. Перми, колониям общего режима и питомнику при Пермском колледже юстиции. Для выявления инвазированности безнадзорных животных обследовали кошек и собак из Пермского муниципального приюта.

Фекалии плотоядных собирали сразу после выделения в чистую сухую пластиковую промаркированную посуду. Исследование проводили комбинированным методом Г.А. Котельникова и В.М. Хренова (1984г.) с раствором аммиачной селитры плотностью 1,3 г/мл. Для диагностики криптоспоридиоза готовили тонкие мазки фекалий с последующим окрашиванием по методике Циля – Нильсена. Для выявления цист лямблий и других простейших, а также яиц трематод свежевыделенные фекалии собирали в контейнеры с консервантом Турдыева, тщательно перемешивали и исследовали методом формалин-эфирного осаждения (Новикова Т.В., 2005). Исследования на лямблиоз проводили трехкратно с интервалом 3-5 дней (Бандурина Т.Ю., Кнорринг Г.Ю., 2003; Коровина Н.А., 2004).


Для диагностики дирофиляриоза собирали пробы венозной крови в количестве 2-3-мл с добавлением гепарина; 1 мл гепаринизированной крови отстаивали с 9 мл дистиллированной воды в течение 5 мин, затем центрифугировали 5 мин при 2000 об/мин и исследовали осадок на наличие личинок – микрофилярий (Ястреб В.Б., 2005).

Посмертно проводили компрессорную трихинеллоскопию поперечно-полосатых мышц для выявления инцистированных личинок. Таким образом, было исследовано 113 трупов собак и 143 – кошек как домашних, так и безнадзорных.

Для диагностики кровепаразитарных заболеваний (пироплазмоз) готовили тонкие мазки периферической крови собак, полученной из когтя, окрашивали их по методике Романовского-Гимзы, а затем микроскопировали под иммерсионным увеличением микроскопа. Всего таким способом было анализировано 180 проб.



следующая страница >>